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細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)原理是什么?

更新時(shí)間:2020-07-31      點(diǎn)擊次數(shù):1081
   細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
  細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)原理:
  外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)表達(dá),一類是穩(wěn)定表達(dá)(永表達(dá)) 。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達(dá)到高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上,使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因。建立穩(wěn)定細(xì)胞株,一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選。常用的抗性標(biāo)記基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用Hygromycin B、G418和puromycin進(jìn)行選擇性篩選。傳統(tǒng)的穩(wěn)定株篩選方法需要通過外源基因的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選, 終獲得從單一細(xì)胞擴(kuò)增起來的穩(wěn)定細(xì)胞株, 該方法陽性率低,周期長,工作量大。慢病毒是一種RNA病毒,攜帶的外源基因在病毒感染細(xì)胞后需要逆轉(zhuǎn)錄為DNA,再整合到宿主細(xì)胞基因組以后才能表達(dá)。利用慢病毒必須整合到宿主基因組的特性來篩選穩(wěn)定株的方法克服了傳統(tǒng)方法的弊端,可以在短時(shí)間內(nèi)獲得高效率的穩(wěn)定細(xì)胞株。篩選得到的細(xì)胞或者可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白,用于蛋白的擴(kuò)增和富集;或者得到穩(wěn)定沉默特定基因的細(xì)胞株。
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