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提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的方法

更新時(shí)間:2020-08-14      點(diǎn)擊次數(shù):1148

1.選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑

   不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn),通過這些資料可選擇適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然,適合的是高效、低毒、方便、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑。

2.保持佳的細(xì)胞狀態(tài)

   一般低的細(xì)胞代數(shù)(<50)能保基因型不變。適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長期的細(xì)胞,細(xì)胞生長旺盛,容易轉(zhuǎn)染。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。也就是說同一種系的細(xì)胞株,在各實(shí)驗(yàn)室不同培養(yǎng)條件下,其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變,導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。因此,如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低,可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果。

3.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法

   不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法,但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法,但也要注意,因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同,質(zhì)粒定量差異,操作手法上的差異等,其轉(zhuǎn)染效果可能不同,應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來確定較佳轉(zhuǎn)染條件。

4.所構(gòu)建載體的質(zhì)量。

    轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建(病毒載體,質(zhì)粒DNA,RNA,pcr產(chǎn)物,寡核苷酸等)也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細(xì)胞感染效率較高,但不同病毒載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細(xì)胞周期,如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細(xì)胞,此外還需考慮一些安全問題(如基因污染)。除載體構(gòu)建外,載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響,如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對細(xì)胞有毒性作用,轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行,因此選擇組成或可調(diào)控,強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要,同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。

 

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