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透射電鏡檢測時的取材要求是什么?

更新時間:2021-12-24      點擊次數(shù):499
 
  透射電鏡檢測是以電子束透過樣品經(jīng)過聚焦與放大后所產生的物像,投射到熒光屏上或照相底片上進行觀察。電子與樣品中的原子碰撞而改變方向,從而產生立體角散射。散射角的大小與樣品的密度、厚度相關,因此可以形成明暗不同的影像。由于電子易散射或被物體吸收,故穿透力低,必須制備超薄切片(通常為50~100nm)。要在機體死亡后的數(shù)分鐘內取材,組織塊要小(1mm3以內),常用戊二醛和鋨酸雙重固定,包埋介質包埋,用超薄切片機切成薄片,再經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛等進行電子染色。
  透射電鏡檢測的取材要求:
  1、定位準確:解剖水平的準確定位誤差應≤1mm。注意各組實驗動物取材區(qū)位及方位的*性和代表性。
  2、操作迅速:組織離開活體后,以zui快的速度浸入戊二醛固定液,0.5min或zui多2min。事先準備好l1.5ml尖頭PEP管里面盛滿預冷的戊二醛固定液。
  3、標本尺寸大?。航M織塊大小需要在1mm3左右,樣品太大會導致樣品固定不充分。(提示:把較大標本塊修整成符合要求的顆粒時,須事先準備一個蠟盤,滴入戊二醛固定液,把標本浸在液滴中修整,確認每個小標本顆粒都包含需要的結構內容,用牙簽挑出3~5粒標本,放入l1.5ml尖頭PEP管。)
  4、保持低溫環(huán)境:為降低自溶酶活性,在4℃低溫條件下取材,容器和器械預冷;將修整好的標本塊放入戊二醛固定液后,普通4℃冰箱保存。細胞取材流程及要求
  取材流程:細胞直接刮下,細胞懸液離心,棄上清,PBS清洗2次,離心成團,加入2.5%戊二醛固定液4℃過夜后快遞。懸浮細胞、菌液可直接視為細胞懸浮液操作。
  固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌可直接將菌落挑到PBS中,后續(xù)操作*。
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