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細胞周期檢測服務(wù)

簡要描述:細胞周期檢測服務(wù)間期又分為三期:即DNA合成前期( G1期)、DNA合成期( S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細胞在分裂結(jié)束后暫時離開細胞周期,停止細胞分裂,執(zhí)行-定生物學(xué)功能 ( G0期)。由于細胞周期各時相的DNA含里不同,通常正常細胞的G1/ G0期具有二倍體細胞的DNA含量(2N) ,而G2/ M期具有四倍體細胞的DNA含里(4N) ,而S期的DNA含里介于二倍體

  • 更新時間:2024-10-18
  • 廠商性質(zhì):代理商
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應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè)

實驗共分以下4個主要步驟:

1.細胞鋪盤

HeLa S3細胞,密度為80%左右分盤,使鋪盤密度在50%左右, 為滿足流式細胞儀上機要求,細胞數(shù)目需大于1x10組。2.細胞同步化處理:

a)加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h

b)用溫育的PBS洗4次,更換新鮮培養(yǎng)基,培養(yǎng)9h

c)再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.樣品收集;

a)分別收取釋放2h(S期),6h(G2/M期)和12h(G1期)細胞樣品

b)每個樣品收取都使用預(yù)冷的PBS洗滌4次,1000g離心5min, 棄上清

c) 100uL PBS重懸沉淀,吸取出細胞懸液于移液器中,于移去細胞的管中加入900μl預(yù)冷的70%乙醇,旋渦振蕩器震蕩中滴入細胞懸液。

d) 4C固定一小時或更 長時間。

e) 1500rmp,離心10min,去固定液。

f)細胞染色液配制: 50xRNase A母液: 50xPI母液: PBS=20: 20: 960; RNase A母液濃度1mg/mL,工作濃度20μg/mL; PI母液濃度2.5mg/mL, 工作濃度50μg/mL 。

g)細胞37度染色1h。根據(jù)細胞童,加入一定體積的細胞染色液(1~1.5mL) 重懸,使上機時細胞通過率為

200~350Cl/s,,染色液不可過多或過少,過多則細胞密度過低上機速度嚴重不足,過少則導(dǎo)致細胞粘結(jié)。

h) 300目篩網(wǎng)過濾至流式管中。

4.上機檢測;

流式細胞儀上機檢測,計數(shù)50000個細胞。

5.同步化數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)使用ModFit軟件分析。




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