簡(jiǎn)要描述:原位雜交實(shí)驗(yàn)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱(chēng)為原位雜交。用原位雜交技術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水平來(lái)探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。細(xì)胞原位雜交技術(shù)服務(wù)已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
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原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟:前期胚胎的制備。
原位雜交**天進(jìn)行重新水化和固定、預(yù)雜交、雜交。
原位雜交第二天進(jìn)行1將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)2加入50%甲酰按/2XSSCT溶液1量升,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。3署換2XSSCT1ml,60°℃,放置15分鐘。4詈換0.2XsSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。5用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動(dòng)。6室溫下加1ml 1:2:7溶液,時(shí)間為一小時(shí)。7 按1:3000的比例在1∶2:7溶液中加入酶連**抗體,40冰箱過(guò)夜。
原位雜交第三天進(jìn)行1)用1ml含10%熱滅**清的MABT溶液置換抗體溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mIMABT置換,25分鐘,再用1mIMABT溶液詈換,一小時(shí)以上,后用1mIMABT溶液置換,25分鐘。2用1ml 1mM米勝的Staining buffer洗一次,每次放置五分鐘。3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,吸去stainingbuffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM米唑),十六孔板外面包,上錫箔紙以避光,避免搖動(dòng),室溫下顯色。4)每隔一小時(shí)觀察胚胎是否開(kāi)始顯色5)將顯色的胚胎中的底物吸出,用
我們擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、精良的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團(tuán)隊(duì)包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測(cè)、基因檢測(cè)等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過(guò)高度細(xì)分、較好的的服務(wù)平臺(tái),為廣大客戶(hù)提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù)。目前,及,涉及臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。
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