簡要描述:Edu染色服務:EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,它們能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶滲入正在復制的DNA分子,然后分別利用免疫熒光技術(shù)、與Apollo熒光染料特異性反應檢測細胞增殖情況。這是一種新型的非放射性同位素細胞增殖檢測的方法,在細胞培養(yǎng),實體組織及臨床研究中得到了廣泛的應用。
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Edu染色服務:實驗步驟
1.將處于對數(shù)生長期的各實驗組細胞**消化后,培養(yǎng)基重懸成細胞懸液,并計數(shù)。
2.根據(jù)細胞生長快慢決定鋪板細胞密度,每組3-5重復,根據(jù)實驗設計決定鋪板數(shù)量。
3.統(tǒng)一鋪好后,待細胞沉淀下來后,在顯微鏡下觀察各實驗組的細胞密度,如果密度不均勻,則固定一組,微調(diào)其他組細胞的量再次鋪板(如:發(fā)現(xiàn)NC組細胞較多,降低細胞量再次鋪板),放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.鋪板后第一天與第四天,配制2X(20uM)的EDU工作液,將37℃預熱的2X的EDU工作液等體積加入96孔板中,是EDU終濃度變?yōu)?X,繼續(xù)孵育細胞2小時,EDU標記細胞完成后,去除培養(yǎng)液,并加入1mL固定液,室溫固定15分鐘,去除固定液,每孔用1mL洗滌液洗滌細胞3次,每次3-5分鐘,去除洗滌液,每孔用1mL通透液,室溫孵育10-15分鐘,去除通透液,每孔用1mL洗滌液洗滌細細胞1-2次,每次3-5分鐘。用內(nèi)源性過氧化物酶封閉液室溫孵育20分鐘,用洗滌液洗滌3次,每次3-5分鐘。
5.EDU檢測:每孔加入50uL的Click反應液,室溫避光孵育30分鐘,吸出反應液,用洗滌液洗滌3次,每次3-5分鐘。
6.樣品的顯色 :在樣品上加Streptavidin-HRP工作液,室溫孵育30分鐘。 用洗滌液洗滌3次,每次2分鐘。加入0.1ml TMB顯色液,室溫孵育5-30分鐘或根據(jù)顯色情況孵育適當時間。直接在370nm或620-650nm測定吸光度?;蚣尤?5微升2M 終止反應,隨后在450nm測定吸光度。
Edu染色服務
伊萊博生物科技(上海)有限公司,公司總部位于上海長江軟件園。2022年1月與上海交通大學藥學院成立聯(lián)合研究中心,主要以生命科學研究為基礎,專注于研究成果轉(zhuǎn)化及技術(shù)服務創(chuàng)新,建立了包含腫瘤生物學、病理學、免疫學、細胞生物學、生物化學與分子生物學以及動物實驗等學科的研究服務體系,為醫(yī)學領(lǐng)域的發(fā)展做出了重要貢獻。
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