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流式單標(biāo)實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)要描述:流式單標(biāo)實(shí)驗(yàn)是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一,是細(xì)胞平臺(tái)實(shí)驗(yàn)的重要組成部分,由經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成。流式細(xì)胞術(shù)工作原理是在細(xì)胞分子水平上通過單克隆抗體對(duì)單個(gè)細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個(gè)細(xì)胞,并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù),具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好的優(yōu)點(diǎn),是當(dāng)代先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一。

  • 更新時(shí)間:2024-03-14
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流式單標(biāo)步驟通常包括以下幾個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié):

 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備。首先,需要收集目標(biāo)細(xì)胞樣品,如細(xì)胞懸液或組織細(xì)胞液,以獲得細(xì)胞單層的懸浮液。然后,用PBS洗滌細(xì)胞樣品,以去除細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)胞培養(yǎng)液和廢棄物。100001. 制備單標(biāo)熒光染色試劑??蒲腥藛T選擇的單標(biāo)熒光染色試劑是一種粘附于目標(biāo)細(xì)胞表面的抗體探針,這些抗體可以特異性地與目標(biāo)抗原結(jié)合,并發(fā)出熒光信號(hào)。常用的單標(biāo)染色試劑有FITC(熒光素異硫氰酸酯)、PE(葡萄糖相映射學(xué))等。

 染色反應(yīng)。將制備好的單標(biāo)染色試劑加入之前準(zhǔn)備好的細(xì)胞樣品中,進(jìn)行充分的染色反應(yīng)。染色結(jié)束后,用PBS洗滌細(xì)胞樣品,以去除未結(jié)合的熒光抗體。

 流式細(xì)胞儀分析。使用流式細(xì)胞儀對(duì)染色實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析,得到關(guān)于細(xì)胞表面抗原的熒光信號(hào)。流式細(xì)胞儀可以通過激光照射懸浮細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞表面與標(biāo)記抗體結(jié)合的熒光強(qiáng)度。通過流式細(xì)胞儀的檢測(cè)系統(tǒng),可以同時(shí)分析多個(gè)參數(shù),如細(xì)胞大小、熒光染色強(qiáng)度和細(xì)胞表面抗原的表達(dá)水平。2

 數(shù)據(jù)分析與報(bào)告。通過流式細(xì)胞儀獲得的原始數(shù)據(jù)可以使用不同的軟件進(jìn)行分析,如FlowJoKalistoCytobank。這些軟件可以檢測(cè)和計(jì)算細(xì)胞表面抗原的表達(dá)水平,并生成圖形和統(tǒng)計(jì)結(jié)果。


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